Το υπερηχογράφημα δευτέρου τριμήνου ή Β΄ επιπέδου, πραγματοποιείται μεταξύ της 21ης και 24ης εβδομάδας. Εστιάζει στην βιομετρία του εμβρύου (δηλαδή στις μετρήσεις του κεφαλιού, της κοιλιάς και του μηρού) που οδηγεί στον προσδιορισμό του εκτιμώμενου βάρους του, και στην λεπτομερή μελέτη της ανατομίας του κατά συστήματα (εγκέφαλος, καρδιά, νεφροί, πνεύμονες, άκρα, πρόσωπο, σπονδυλική στήλη, κλπ). Επίσης προσδιορίζουμε την ποσότητα του αμνιακού υγρού και την θέση και τη σύσταση του πλακούντα. Με τον τρόπο αυτό ελέγχουμε την υγεία και την ανάπτυξη του εμβρύου. Επανελέγχουμε το μήκος του τραχήλου και την αιμάτωση της μήτρας για τον υπολογισμό του κινδύνου για πρόωρο τοκετό και προεκλαμψία αντίστοιχα.